工作原理:

本试剂盒利用特殊修饰的反转录酶以特异性引物作为转录引物，将体系内的RNA逆转录为cDNA，并以重组酶介导等温核酸扩增（Recombinase Aided Amplification，RAA）技术对检测目标序列进行扩增。在等温条件下（通常为42℃），RAA体系内的重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体 Rec/ssDNA，在辅助蛋白和单链结合蛋白 SSB 的帮助下，侵入cDNA 模板或双链DNA产物内；在侵入位点形成 D-loop 区域，并开始对 DNA 链进行扫描；待找到与引物互补的目的区域后，复合体 Rec/ssDNA 解体的同时，聚合酶也结合到引物的 3′ 末端，以样品DNA为模板，12 ~ 20 min即可实现对目的基因片段的高效扩增。扩增体系含有正、反向扩增引物和特异性的分子探针。在 42 ºC 下，特殊修饰的探针经过exo 酶的切割后，可使用荧光监测设备对目标片段扩增过程进行实时监控。适用于各种品牌的荧光定量 PCR 仪、恒温荧光扩增仪器等荧光检测设备。

正、反向引物建议的设计长度为30 ~ 35 nt之间，长度通常长于PCR引物。引物过短可能会降低反应重组率，响扩增速度和检测灵敏度；引物过长则有可能形成二级结构而影响扩增。引物浓度应根据模板的浓度进行筛选，以确定最佳浓度，提升扩增效率。扩增片段的长度推荐为150 ~ 300 bp，通常不超过 500 bp。注意，模板DNA片段过长或出现重复序列时，扩增的准确性会降低。

在正、反向引物中间，设计一段长度为 46 ~ 52 nt 与目的片段互补的探针序列。探针序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。探针序列共有四个修饰位点：距离 5’端的≥35 nt 的中部位置标记一个dSpacer（四氢呋喃，THF），作为核酸外切酶的识别位点；THF 位点的上游标记一个荧光基团，下游标记一个粹灭基团，两个基团的间距为 2 ~ 4 nt；THF 距离 3’末端≥15 nt，并且 3’末端标记一个修饰基团，例如胺基、磷酸基团或 C3-Spacer。

预期用途:

本试剂盒仅供科研使用，适用于各种DNA模板的扩增，核酸扩增产物可使用进行检测。

包装规格：48次，货号JY0206。

RAA核酸扩增试剂盒的储存条件：-20℃避光保存，有效期14个月，避免重压和反复冻融。反应单元开封后，须当天用完。

1. 本产品仅供科研使用。使用前请仔细阅读说明书，严格按照说明书操作。违反或者未按说明书进行操作可能导致错误结果。
2. 产品应依照说明书要求，储存于合适的环境和温度下，并在有效期内使用。储存不当或产品过期可能导致错误结果。
3. 为避免交叉污染，试剂配制区及检测区应分隔开。
4. 实验需设置不加模板的空白对照，以确认是否有待扩增核酸的污染。
5. 如用于病毒等病理样品检测，所有检测样本及试剂均按照传染性物质对待，实验过程中穿工作服，戴一次性手套，并经常更换手套，以做好工作人员的防护并避免交叉污染。
6. 不能使用过有效期的产品。